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了解液相色譜分析柱化學性質參數(shù),正確使用效率更高

更新時間:2021-05-18        閱讀:1668
  液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分,了解其化學性質參數(shù),學會正確使用可以避免一些不必要的麻煩,進而提高實驗人員的工作效率。
 
  液相色譜分析柱化學性質參數(shù):
 
  1、載碳量
 
  載碳量是基質表面鍵合相的比例,載碳量高,則保留增加,適合分析非極性化合物。
 
  2、鍵合相
 
  鍵合試劑不同,對化合物的選擇性不同,一般長鏈的烷基鍵合相(C18 C8)比短鏈的(C4 C3)穩(wěn)定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩(wěn)定。
 
  3、封端
 
  用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來,以減少殘留的硅醇基,減輕待測組分與酸性硅羥基反應而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象。尤其對于極性樣品而言,未封端處理的色譜柱分離效果較差。
 
  4、硅膠基質
 
  硅膠基質是通用的基質,強度大,化學修飾容易,但使用的pH值范圍有限(一般為2—8,特殊修飾的可以達到1—12)。
 
  5、聚合物基質
 
  聚合物基質多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化學穩(wěn)定,應用pH范圍寬,具有更強的疏水性,對蛋白質等樣品分離效果較好;但強度較小,有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損,批次重復性較差,商品化色譜柱不多,一般價格較貴。
 
  液相色譜分析柱在使用前,至好進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是至合適條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。
 
  1、樣品的前處理:
 
  a、至好使用流動相溶解樣品。
 
  b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質。
 
  c、使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質。
 
  2、流動相的配制:
 
  a、流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。
 
  b、流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學反應(特殊情況除外)。
 
  c、流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時能得到好的分離效果;同時降低柱壓降,延長液體泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
 
  3、流動相流速的選擇:
 
  因液相色譜分析柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求更好柱效,至好使用更好流速。對內徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
 

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