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HPLC泵的十個使用要點分析

更新時間:2019-04-25        閱讀:4623
HPLC是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,其以液體作為流動相,并采用顆粒極細的固定相的柱色譜分離技術(shù)。HPLC因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析和分離高沸點且不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點而被廣泛應(yīng)用于生物化學、藥物及臨床分析,世界各國已將該法收載于藥典。

HPLC有五大系統(tǒng)構(gòu)成,其中,泵是HPLC的動力系統(tǒng)。液體,只有通過泵的轉(zhuǎn)動而使之流動。因此掌握泵的使用要點對于正確使用HPLC有著至關(guān)重要的意義。

 

1、操作泵之前,用至少兩個體積(標準脫氣機30mL,對微脫氣機10mL)沖洗真空脫氣機,特別是當泵關(guān)閉了一段時間后(例如:過夜),以及在通道中使用揮發(fā)性混合溶劑時,防止溶劑瓶內(nèi)的玻璃濾頭(過濾器)堵塞及長菌,當濾頭表面有黑色或黃色污染層說明發(fā)生了堵塞,應(yīng)立即清洗或更換。

2、將裝有溶劑瓶的溶劑箱放在泵上面或較高處。當在四元泵上使用鹽溶液或有機溶劑時,建議將鹽溶液接在下面的梯度閥口上,將有機溶劑接在上面的梯度閥口上,有機溶劑通道建議在水或鹽溶液通道的正上面。建議用水定期沖洗所有MCGV通道除去可能在閥口析出的鹽結(jié)晶。
 

3、定期檢查排液閥的過濾白頭。檢查方法:擰開排液閥,以水作流動相。

對于標準脫氣機(G1322A),流速5ml/min水,若壓力大于10bar,則建議更換。 

對于微量脫氣機(G1379A),流速2ml/min水,若壓力大于5bar,則建議更換。


4、當使用低流速時,檢查所有1/16英寸接頭有無滲漏(用壓力測試或漏液測試。每當更換泵密封墊時排液閥慮芯也應(yīng)更換。


5、更換活塞密封墊時檢查活塞桿上是否有劃痕。有劃痕的活塞將導致輕度滲漏,并降低密封墊的使用壽命。應(yīng)盡早更換有劃痕的活塞。


6、使用緩沖溶液時,關(guān)泵前先用水沖洗系統(tǒng)。當需要長時間使 用0.1摩爾或更高濃度的緩沖液時,建議選用密封墊清洗附件,以減少對密封墊及活塞桿的磨損。


7、如果使用了高濃度的緩沖鹽,可以考慮用熱水(50-60℃)來沖洗鹽通道來確保沒有緩沖鹽殘留在系統(tǒng)中。


8、更換活塞密封墊后應(yīng)按照密封墊安裝步驟對其進行磨合,但磨合不適用于正相密封墊。


9、當泵頭安裝有柱塞清洗附件時,由于該附件中也有密封墊,這樣就會增加活塞桿運動時的阻力。所以開泵前一定要用10%異丙醇,并將其流速調(diào)至約2-3滴/分鐘使溶液流過沖洗裝置。(對于二元泵SL,如果不使用鹽溶液可以不開)10%異丙醇有助于降低水的表面張力,并有抑菌作用。不要用其它溶劑代替。
 

10、當泵頭安裝有沖洗附件而不開啟10%異丙醇,會使密封墊及活塞桿的壽命減短(二元泵SL除外),泵頭如果發(fā)出“吱吱”聲不影響使用和泵的精度如果有必要,可以改變壓縮因子(compressibility)來達到更好的效果。


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